檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質
來源: | 作者: | 時間:2018-05-26 | 瀏覽  | 設置字體:

一、實驗原理

某些化學試劑能使生物組織中的有關有機化合物,產生特定的顏色反應。

1、可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與斐林試劑發生作用,可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。

葡萄糖+ Cu ( OH )2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓(磚紅色)+ H 2O,即Cu ( OH ) 2被還原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2、脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)。淀粉遇碘變藍色。

3、蛋白質與雙縮脲試劑發生作用,產生紫色反應。(蛋白質分子中含有很多肽鍵,在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用,產生紫色反應。)

二、實驗材料

1、做可溶性還原性糖鑒定實驗,應選含糖高,顏色為白色的植物組織,如蘋果、梨。(因為組織的顏色較淺,易于觀察。)

2、做脂肪的鑒定實驗。應選富含脂肪的種子,以花生種子為最好,實驗前一般要浸泡3~4小時(也可用蓖麻種子)。

3、做蛋白質的鑒定實驗,可用富含蛋白質的黃豆或雞蛋清。

三、實驗注意事項

1、可溶性糖的鑒定

a.應將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲存,使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑;斐林試劑很不穩定,甲、乙液混合保存時,生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水;

b. 切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進行檢測。甲、乙液分別加入時可能會與組織樣液發生反應,無Cu ( OH ) 2生成。

2、蛋白質的鑒定

a. A液和B液也要分開配制,儲存。鑒定時先加A液后加B液;先加NaOH溶液,為Cu2+與蛋白質反應提供一個堿性的環境。A、B液混裝或同時加入,會導致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。

b、CuSO4溶液不能多加;否則CuSO4的藍色會遮蓋反應的真實顏色。

c. 蛋清要先稀釋;如果稀釋不夠,在實驗中蛋清粘在試管壁,與雙縮脲試劑反應后會粘固在試管內壁上,使反應不容易徹底,并且試管也不易洗干凈。

3、斐林試劑與雙縮脲試劑的區別:

 

斐林試劑

雙縮脲試劑

試劑成分

0.1g/mlNaOH溶液

0.1g/mlNaOH溶液(雙縮脲試劑A)

0.05g/mlCuSO4溶液

0.01g/mlCuSO4溶液(雙縮脲試劑B)

是否混合

混合后再滴加

先加雙縮脲試劑A后加雙縮脲試劑B

是否加熱

水浴加熱

不加熱


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